GISH-原位雜交-武漢貝科新肽
武漢貝科新肽科技有限公司
- 主營產品:原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
- 公司地址:湖北省武漢市洪山區關山大道289號紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號
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菌落的裂解及DNA結合于纖維素濾膜
(1) 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,展平保鮮膜,使濾膜均勻濕潤,讓濾膜留于原處2-3分鐘。
(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復步驟(1)。
(3) 吸干濾膜,將濾膜轉移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復一次該步驟。
(4) 吸干濾膜,把它轉移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。
(5) 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間,在真空烤箱中于80℃干烤2小時,固定DNA。
(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是在20世紀80年代末在性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非性分子細胞遺傳技術,以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導分子(reporter molecule)結合,雜交后再通過細胞化學過程連接上熒光染料.FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯的單與探針分子特異性結合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優點,不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎上又發展了多彩色熒光原位雜交技術和染色質纖維熒光原位雜交技術.

原位雜交是一種強大的技術,它使研究人員能夠在細胞或組織中確定特定DNA或RNA序列的位置。這項技術在基礎研究和臨床應用中都有廣泛的應用。通過了解原位雜交的基本原理和實驗步驟,研究人員可以更好地理解其功能并應用于他們的研究中。
原位雜交技術的定義和基本原理原位雜交技術是一種基于核酸分子雜交原理,將標記的核酸探針與生物組織或細胞中的DNA或RNA進行特異性結合,從而在細胞水平上檢測目標核酸序列分布的技術。原位雜交技術的基本原理是利用DNA或RNA的互補性,通過加熱或化學反應使探針與組織或細胞中的目標核酸序列形成雙鏈復合物,進而實現目標核酸序列的定位。